4 Expérience de biologie moléculaire 209

1. Comprendre les expériences de biologie moléculaire 210
2 Préparation et culture du milieu de croissance microbien 212
Expérience 1 : Préparation et stérilisation des milieux de culture microbiens 212
3. Transcription inverse et réaction PCR 216
Expérience 2 : Réaction en chaîne par polymérase (PCR) 216
Expérience 3 : Réaction en chaîne par polymérase après transcription inverse (RT-PCR) 220
Expérience 4 Réaction en chaîne par polymérase en temps réel (PCR en temps réel) 224
4 Techniques d'analyse de l'ADN plasmidique 228
Expérience 5 Isolement de l'ADN plasmidique 228
Expérience 6 : Digestion par enzyme de restriction et confirmation de l'ADN plasmidique 232
Expérience 7 : Électrophorèse 235
5 Applications de la quantification des protéines et de l'analyse antigène-anticorps 239
Expérience 8 Méthode quantitative des protéines 239
Expérience 9 : ELISA direct (dosage immuno-enzymatique, ELISA) 244
Expérience 10 : Dosage immuno-enzymatique (ELISA) indirect 248
Expérience 11 Dosage immuno-enzymatique (ELISA) - ELISA sandwich 252
Expérience 12 Marquage à la biotine des anticorps 257
Expérience 13 : Dosage immuno-enzymatique (ELISA) – ELISA compétitif 261
6. Importance et utilisation des expériences de biologie moléculaire 265

5 Expérience de protéomique 267

1 Comprendre les expériences de protéomique 268
2 Confirmation des modifications de l'expression protéique dans les cellules animales 271
Expérience 1 : Confirmation des modifications de l’expression protéique dans les cellules animales (1) – Lyse cellulaire et extraction des protéines totales 273
Expérience 2 : Confirmation des modifications de l’expression protéique dans les cellules animales (2) – Quantification et échantillonnage des protéines 279
Expérience 3 : Confirmation des modifications de l’expression des protéines dans les cellules animales (3) – Création d’un gel SDS-PAGE 285
Expérience 4 : Confirmation des modifications de l’expression protéique dans les cellules animales (4) – SDS-PAGE et transfert 292
Expérience 5 : Confirmation des modifications de l’expression protéique dans les cellules animales (5) - Coloration Ponshu S et Western Blot 298
Expérience 6 : Confirmation des modifications de l’expression protéique dans les cellules animales (6) – Développement de films et analyse des niveaux d’expression protéique 303
3 Confirmation des interactions protéine-protéine dans les cellules animales 307
Expérience 7 : Criblage des protéines de liaison par immunoprécipitation 308
4 Expression et purification des protéines de fusion dans les cellules animales 314
Expérience 8 : Confirmation de la purification de la protéine de fusion 315
Expérience 9 : Confirmation de l'élution de la protéine de fusion 320
5 Identification et utilisation des sites de phosphorylation dans les cellules animales 323
Expérience 10 : Détection des protéines phosphorylées à l’aide d’anticorps anti-phosphorylés (1) 325
Expérience 11 : Détection des protéines phosphorylées à l'aide d'anticorps anti-phosphorylés (2) 329
Expérience 12 Introduction et application des mutants de sites de phosphorylation 333
6 Importance et utilisation des expériences de protéomique 338

6 Expérience d'immunologie 339

1. Comprendre les expériences d'immunologie 340
2 Observation des réactions antigène-anticorps et des cellules immunitaires dans le sang 342
Expérience 1 : Détermination du groupe sanguin par réaction antigène-anticorps (groupement sanguin ABO) 342
Expérience 2 : Analyse des cellules sanguines à l'aide de la coloration de Wright-Giemsa (347)
3 Comprendre et expérimenter les réponses immunitaires allergiques 352
Expérience 3 : Culture de mastocytes (cellules effectrices clés de l’allergie) 352
Expérience 4 : Dégranulation des mastocytes médiée par les IgE (test de libération de β-hexosaminidase : dégranulation des mastocytes) 357
4 Étude expérimentale sur l'activation des macrophages dans les réponses immunitaires inflammatoires 365
Expérience 5 : Isolement des cellules immunitaires dérivées de la moelle osseuse
cellules immunitaires) 365
Expérience 6 Différenciation des macrophages dérivés de la moelle osseuse 370
Expérience 7 Production d'oxyde nitrique induite par le LPS à partir de macrophages 375
5 Compréhension et analyse morphologique du tissu lymphatique 380
Expérience 8 : Analyse des caractéristiques morphologiques des tissus lymphoïdes : thymus, rate 380
Expérience 9 : Analyse des caractéristiques morphologiques des tissus lymphoïdes : ganglions lymphatiques 385
6. Isolement et analyse des cellules immunitaires par cytométrie en flux 390
Expérience 10 : Isolement des cellules immunitaires dérivées de la rate pour analyse par cytométrie en flux (isolement des splénocytes pour analyse par cytométrie en flux) 390
Expérience 11 : Prétraitement des cellules immunitaires pour l’analyse par cytométrie en flux 394
Expérience 12 : Comprendre les cytomètres de flux 400
Expérience 13 Analyse des lymphocytes, des granulocytes et des monocytes par cytométrie de flux (405)
Expérience 14 : Analyse des cellules T auxiliaires (CD4+) ou cytotoxiques (CD8+) à l'aide de la cytométrie en flux [410]
7 Importance et utilisation des expériences immunologiques 417
Recherche 419