1 Expérience de biologie cellulaire 1

1. Comprendre les expériences de biologie cellulaire 2.
2 Expériences utilisant des cellules procaryotes 3
Expérience 1 : Préparation et stérilisation du milieu de culture microbien 4
Expérience 2 Courbe de croissance bactérienne 9
Expérience 3 : Test de sensibilité aux antibiotiques à l'aide du DISC 14
Expérience 4 : Production de cellules compétentes à l’aide d’E. coli 18
Expérience 5 : Transformation par choc thermique d'E. coli 22
Expérience 6 Isolement de l'ADN plasmidique (mini-préparation d'ADN plasmidique) 26
3 Expériences utilisant des cellules eucaryotes 30
Expérience 7 : Culture de cellules animales 31
Expérience 8 : Mesure de la viabilité cellulaire (test MTT) 37
Expérience 9 : Observation de la fragmentation de l’ADN due à l’induction de l’apoptose 41
Extraction d'ARN et synthèse d'ADNc à partir des lignées cellulaires 10 et 45
Expérience 11 Isolement cellulaire à partir de tissu splénique de rat 50
Expérience 12 : Extraction d’ADN génomique à partir de tissus animaux 54
4 Importance et utilisation des expériences de biologie cellulaire 58

2 Expérience de biochimie 59

1 Comprendre les expériences de biochimie 60
Expérience 1 : Aperçu des méthodes d'extraction et d'analyse des biomolécules 60
2 Extraction et quantification des protéines à partir de cellules animales 65
Expérience 2 Extraction de cellules entières 65
Expérience 3 : Extraction de protéines cytoplasmiques et nucléaires à l’aide d’un tampon de lyse cellulaire de qualité stockage 69
Expérience 4 : Mesure de la concentration protéique à l’aide d’un spectrophotomètre et du réactif de Bradford 73
3 Analyse de l'expression des protéines par Western blot 78
Expérience 5 : Préparation du gel de polyacrylamide 78
Expérience 6 Électrophorèse des protéines et coloration des gels 84
Expérience 7 Western Blot et coloration de Ponshu 88
Expérience 8 : Développement du film et analyse de l'expression des protéines 94
4 Observation du polymorphisme dans les noyaux et l'ADN des cellules cancéreuses à l'aide d'un microscope à fluorescence 98
Expérience 9 : Utilisation d'un microscope à fluorescence 98
Expérience 10 : Observation du polymorphisme dans les noyaux et l’ADN des cellules cancéreuses à l’aide d’un microscope à fluorescence 104
5 Extraction d'ADN génomique et analyse des taux de réparation des dommages à l'ADN induits par la lumière UV 108
Expérience 11 : Induction de lésions de l’ADN par la lumière UV 108
Expérience 12 : Isolement de l'ADN génomique 111
Expérience 13 : Mesure de la concentration d’ADN à l’aide de Nanodrops 115
Expérience 14 : Mesure des taux de réparation des dommages à l’ADN 118
6. Importance et utilisation des expériences biochimiques 123

3 Expérience de génomique 125

1 Comprendre les expériences de génomique 126
Expérience 1 Orientation 128
Expérience 2 : Calcul des concentrations des réactifs 131
2 Typage ADN 133
Expérience 3 Isolement de l'ADN génomique à partir du sang périphérique 133
Expérience 4 : Application du typage de l’ADN par amplification PCR 138
Expérience 5 : Détermination de l'hétérozygotie dans la région VNTR 145
Technologie de clonage 3 TA 150
Expérience 6 : Amplification PCR de régions spécifiques à utiliser pour le clonage TA 150
Expérience 7 : Confirmation du produit PCR pour TA et purification du produit PCR 154
Expérience 8 : Ligation TA et transformation bactérienne 157
Expérience 9 Isolement de l'ADN et traitement par enzyme de restriction à partir de transformants clonés TA 163
4 Technologie de l'ADN recombinant 171
Expérience 10 PCR de l'ADNc pour le vecteur d'expression 171
Expérience 11 Traitement enzymatique de restriction de l'ADN vecteur et de l'ADN d'insertion 181
Expérience 12 Extraction de gel et réaction de ligation 186
Expérience 13 : Vérification de la ligation et transformation 190
Expérience 14 : Identification des colonies transformantes et PCR des colonies 193
Expérience 15 Isolement de l'ADN recombinant et traitement par enzyme de restriction 197
Expérience 16 Analyse du séquençage de l'ADN recombinant 204
Recherche 209